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Strep-Tactin琼(qiong)脂糖凝(ning)胶(jiao)FF是一种将Strep-Tactin键合在琼(qiong)脂糖凝(ning)胶(jiao)微球(qiu)上形成的(de)(de)(de)生物亲(qin)和(he)(he)层析(xi)分离(li)介质(zhi)，主(zhu)要用于(yu)纯(chun)化(hua)Strep II标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸(suan)的(de)(de)(de)小(xiao)标签（WSHPQFEK），由于(yu)标签小(xiao)，仅为1 kDa左(zuo)右，一般不影响融(rong)合后(hou)蛋白质(zhi)的(de)(de)(de)结(jie)构和(he)(he)功能，常用于(yu)融(rong)合表达蛋白质(zhi)的(de)(de)(de)检(jian)测和(he)(he)纯(chun)化(hua)。

本产品(pin)的(de)(de)配基Strep-Tactin是链(lian)霉亲(qin)和(he)素（Streptavidin）的(de)(de)突(tu)变体，与(yu)链(lian)霉亲(qin)和(he)素相比，Strep-Tactin对Strep II标签的(de)(de)亲(qin)和(he)能力至少强(qiang)10倍以上(shang)，能够在(zai)温和(he)的(de)(de)条件下与(yu)Strep II融合蛋白结合和(he)解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度(du)特异(yi)性，一(yi)般一(yi)步(bu)纯化就能获得高纯度(du)的(de)(de)蛋白质样品(pin)。

Strep II标(biao)签蛋白(bai)与(yu)凝胶结合(he)后可使用(yong)脱(tuo)硫(liu)生(sheng)物素竞争方式(shi)进行洗(xi)脱(tuo)，该洗(xi)脱(tuo)方式(shi)比较温和，一般不会影响蛋白(bai)质(zhi)的(de)性质(zhi)。如(ru)Strep II标(biao)签蛋白(bai)质(zhi)能耐受(shou)碱(jian)性条(tiao)件，也可用(yong)碱(jian)液洗(xi)脱(tuo)，比如(ru)10 mM NaOH等。

Strep-Tactin琼脂糖凝胶(jiao)FF能耐(nai)受(shou)较高(gao)的(de)碱性条件，可以用(yong)0.5 M NaOH进行再生清(qing)洗和去除热源等。

另外，2-(4-羟(qiang)基苯唑(zuo))苯甲酸（HABA）也可(ke)用(yong)于凝胶再生(sheng)(sheng)(sheng)，过量(liang)的HABA能以竞(jing)争(zheng)的方式替换脱硫(liu)生(sheng)(sheng)(sheng)物素，但在(zai)无HABA的缓冲液中， Strep-Tactin与HABA会(hui)发生(sheng)(sheng)(sheng)解离，从而使(shi)HABA脱落，实现再生(sheng)(sheng)(sheng)。

技术指标：

使用方法：

1 推荐缓冲液

纯化Strep II标签蛋白

结合缓(huan)冲液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；

 　　　　　　或20 mM NaH2PO4，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4

洗脱缓冲液(ye)：结合(he)缓冲液(ye) + 2.5 mM 脱硫生物素；

 　　　　　　或(huo)10 mM NaOH

再生(sheng)缓冲(chong)液：0.5 M NaOH；

 　　　　　　或结(jie)合缓冲液+1 mM HABA

2 样品准备

上柱的样品(pin)应尽量保持与结合缓冲液一(yi)致(zhi)。通常可用(yong)透析、超滤(lv)、稀(xi)释等方法(fa)处(chu)理样品(pin)。并(bing)且上柱前应过0.45 μm滤(lv)膜(mo)或高速离心去(qu)除不溶物(wu)。

3 样品纯化

3.1 平衡：取适量的(de)Strep-Tactin琼脂(zhi)糖(tang)凝胶FF装入合适的(de)层析柱中，用蒸(zheng)馏水清洗(xi)5个柱体积去除保(bao)存液，再(zai)用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为(wei)100 cm/h。

3.2 上(shang)样(yang)：将准备好的(de)(de)样(yang)品(pin)上(shang)柱，建(jian)议流速(su)为20 ~ 100 cm/h，可根(gen)据(ju)实际结合情况选择流速(su)，能获得(de)较好的(de)(de)效果(guo)。

3.3 再平衡(heng)：上(shang)样后用结合缓冲(chong)液(ye)平衡(heng)10个柱体积以上(shang)，或平衡(heng)至(zhi)基(ji)线，洗去(qu)杂质，推荐流速(su)为100 cm/h。

3.4 洗(xi)脱(tuo)：用洗(xi)脱(tuo)缓冲(chong)液洗(xi)10 ~ 20个柱体积(ji)，建议流速(su)为(wei)100 cm/h，收(shou)集的洗(xi)脱(tuo)液应立即调节pH至稳定范围，并根(gen)据(ju)需(xu)要(yao)置换缓冲(chong)液。

3.5 NaOH再(zai)生：洗(xi)脱目(mu)的(de)蛋白后的(de)柱子用(yong)蒸(zheng)馏水清洗(xi)3 ~ 5个柱体(ti)积(ji)，并用(yong)0.5 M NaOH再(zai)生3 ~ 5个柱体(ti)积(ji)，再(zai)用(yong)蒸(zheng)馏水清洗(xi)至中性，用(yong)20%乙(yi)醇保存(cun)柱子，或进行下(xia)一(yi)次纯化。

3.6 HABA再(zai)生(sheng)：用脱硫生(sheng)物(wu)素(su)洗脱目的(de)蛋(dan)白(bai)的(de)，还(hai)可(ke)以(yi)用HABA缓冲(chong)液(ye)再(zai)生(sheng)，一般用HABA的(de)结(jie)(jie)合(he)缓冲(chong)液(ye)洗15个(ge)柱体积，再(zai)用结(jie)(jie)合(he)缓冲(chong)液(ye)洗30个(ge)柱体积，然(ran)后可(ke)以(yi)用20%乙醇保存(cun)柱子，或进(jin)行下一步纯化。HABA上柱后凝胶颜色会变为(wei)红橙色，在结(jie)(jie)合(he)缓冲(chong)液(ye)平衡后会恢复正常(chang)的(de)白(bai)色，这种再(zai)生(sheng)方式一般使用体积会大些。

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