相关介绍：

重(zhong)组蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)L琼(qiong)脂(zhi)(zhi)糖凝(ning)胶(jiao)FF是将重(zhong)组大(da)消(xiao)化(hua)链(lian)(lian)球菌(jun)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)L（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，简称r-PPL）偶联(lian)在高度交联(lian)的(de)(de)(de)琼(qiong)脂(zhi)(zhi)糖凝(ning)胶(jiao)上的(de)(de)(de)一种亲和纯(chun)化(hua)介质(zhi)。大(da)消(xiao)化(hua)链(lian)(lian)球菌(jun)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)L（PPL）能与(yu)抗(kang)(kang)(kang)体的(de)(de)(de)κ轻(qing)链(lian)(lian)结合而不会影响(xiang)抗(kang)(kang)(kang)体的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)结合位点，这一特(te)性(xing)使(shi)其与(yu)结合抗(kang)(kang)(kang)体Fc区(qu)域的(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)A、蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)G相比(bi)，能更广泛地(di)结合各(ge)种来源及亚类的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)体。如人类的(de)(de)(de)IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻(qing)链(lian)(lian)（人类1、3、4型，小鼠1型）的(de)(de)(de)Fab、scFv等(deng)抗(kang)(kang)(kang)体片段。但不能与(yu)重(zhong)链(lian)(lian)、λ轻(qing)链(lian)(lian)、κ轻(qing)链(lian)(lian)（2型）结合，所以重(zhong)组蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)L琼(qiong)脂(zhi)(zhi)糖凝(ning)胶(jiao)FF不能纯(chun)化(hua)牛、山(shan)羊、绵羊、鸡来源的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)体。

技术指标：

抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：

注：-表(biao)示(shi)不结(jie)合；+表(biao)示(shi)微弱(ruo)结(jie)合；++表(biao)示(shi)中(zhong)等结(jie)合；+++表(biao)示(shi)很(hen)强(qiang)结(jie)合；NA表(biao)示(shi)暂无数(shu)据。能(neng)用(yong)于亲和纯化的抗体一般需要中(zhong)等以上的结(jie)合力。

应用举例：

结合缓冲液(ye)：20 mM磷酸盐缓冲液(ye)（PB），pH 7.4

洗脱(tuo)缓冲液(ye)：0.1 M柠檬(meng)酸-柠檬(meng)酸钠缓冲液(ye)，pH 2.7

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱，用5~10个(ge)柱床体积的蒸馏水洗去保存液；

2)用(yong)结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积；

3)将3 ml小鼠(shu)腹水(shui)用结合缓冲液稀释至15 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；

4)用结合缓(huan)冲液平衡 5~10个(ge)柱床体积(ji)至基线；

5)用(yong)洗脱(tuo)缓冲液洗脱(tuo)抗体，收集洗脱(tuo)峰(feng)，并(bing)用(yong)中和缓冲液调节其pH至中性；

6)每次(ci)使用后再用3~5个柱床体积(ji)的洗(xi)脱缓冲液再生清洗(xi)；

7)SDS-PAGE（图(tu)1）电泳分(fen)析洗脱(tuo)下来(lai)的(de)小鼠单抗纯度在95%以上。

注意事项：

1)预填柱使用(yong)简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯(chun)化任务(wu)。

2)样品洗脱后一般pH很低，应立即(ji)用(yong)碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集(ji)到(dao)的抗(kang)体(ti)(ti)溶液中和到(dao)中性，或(huo)在(zai)收集(ji)容器中事先(xian)装5%~20%、pH 7-9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或(huo)1 M 磷酸(suan)缓冲液），以利于(yu)维持(chi)抗(kang)体(ti)(ti)的生物活性，避免抗(kang)体(ti)(ti)失活。

3)使用时保证柱子和(he)缓(huan)冲液的温度(du)一致，避(bi)免柱床(chuang)内产生(sheng)气泡，影响(xiang)纯化(hua)效(xiao)果(guo)，如果(guo)已经(jing)产生(sheng)气泡，可以自行重装(zhuang)柱子。

4)通常目标样品(pin)洗脱后应继续用(yong)0.1 M柠(ning)檬酸(suan)-柠(ning)檬酸(suan)钠(na)缓(huan)(huan)冲液(ye)（pH 2.0~2.7）洗3~5个(ge)柱体(ti)积(ji)，然后用(yong)平(ping)衡(heng)缓(huan)(huan)冲液(ye)清洗5个(ge)柱体(ti)积(ji)以上，作简易再生(sheng)。

5)使用数次后(hou)应进行在位(wei)(wei)清(qing)洗，建(jian)议用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3个(ge)柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)（10~30min），立即用平衡(heng)(heng)缓冲(chong)液(ye)清(qing)洗5个(ge)柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以(yi)(yi)上；或(huo)70%乙醇(chun)洗5个(ge)柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以(yi)(yi)上（可(ke)保(bao)持4~16h），再(zai)(zai)用平衡(heng)(heng)缓冲(chong)液(ye)清(qing)洗5柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以(yi)(yi)上；或(huo)10mM NaOH洗1-3个(ge)柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)（10-20min），再(zai)(zai)用平衡(heng)(heng)缓冲(chong)液(ye)清(qing)洗5柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以(yi)(yi)上。在位(wei)(wei)清(qing)洗能去(qu)除强疏(shu)水性(xing)蛋白(bai)质(zhi)和脂类，恢复柱(zhu)(zhu)子的载量和流速。

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