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　　易洗(xi)脱链霉(mei)亲和素(su)(su)(su)(su)琼脂糖凝(ning)(ning)胶(jiao)FF是(shi)一种(zhong)将易洗(xi)脱链霉(mei)亲和素(su)(su)(su)(su)键合在琼脂糖凝(ning)(ning)胶(jiao)微球上形成的(de)生(sheng)物(wu)亲和层(ceng)析分离(li)(li)介质(zhi)。与(yu)链霉(mei)亲和素(su)(su)(su)(su)琼脂糖凝(ning)(ning)胶(jiao)FF相比(bi)，该介质(zhi)最主要的(de)特(te)性是(shi)可以(yi)温和洗(xi)脱结合在介质(zhi)上的(de)生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)物(wu)质(zhi)，如(ru)生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)抗(kang)原(yuan)(yuan)、生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)抗(kang)体(ti)、生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)蛋白(bai)、生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)核酸等，可用于(yu)AviTag融合表达(da)的(de)生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)蛋白(bai)纯化(hua)、经过标记反应后的(de)生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)和非生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)物(wu)质(zhi)的(de)分离(li)(li)、生(sheng)物(wu)素(su)(su)(su)(su)化(hua)抗(kang)原(yuan)(yuan)抗(kang)体(ti)固定化(hua)和重复回(hui)收利用等。

　　由(you)于(yu)链霉亲(qin)(qin)和(he)素与生物(wu)素的(de)(de)超强(qiang)亲(qin)(qin)和(he)力，它(ta)们(men)常用(yong)于(yu)检(jian)测、诊断、分析等(deng)领域(yu)，但其超强(qiang)的(de)(de)结合(he)能(neng)力导致温和(he)常用(yong)的(de)(de)方法都不能(neng)将其复(fu)合(he)物(wu)解离(li)，由(you)于(yu)这特(te)特(te)性限(xian)制了(le)(le)它(ta)们(men)在(zai)生物(wu)纯化方面(mian)的(de)(de)大范围应用(yong)，本介质(zhi)的(de)(de)配基(ji)经过分子层(ceng)面(mian)的(de)(de)设计改造，大幅降低与生物(wu)素的(de)(de)亲(qin)(qin)和(he)力，同(tong)时保持了(le)(le)高度特(te)异性，所以一步(bu)层(ceng)析就(jiu)可获得有活性、高纯度的(de)(de)生物(wu)素化物(wu)质(zhi)。

与生(sheng)物素化物质结合后(hou)的(de)(de)ee-SA FF可通(tong)过(guo)含D-生(sheng)物素的(de)(de)缓冲液竞(jing)争洗脱。该洗脱方式非常温和，一般不会影响(xiang)目标物的(de)(de)活性(xing)，洗脱液中的(de)(de)D-生(sheng)物素可通(tong)过(guo)换(huan)液方式去除。

技术指标：

使用方法：

1、色谱柱装填

（1）所(suo)有需(xu)要用到(dao)的(de)材料的(de)温(wen)度要与(yu)色谱(pu)操作的(de)温(wen)度一样，液体最(zui)好(hao)做脱气(qi)处理。

（2）在柱(zhu)子下端加入(ru)蒸(zheng)馏水，以除去柱(zhu)子中的空气，关闭(bi)柱(zhu)子出口，在柱(zhu)内保留少量(liang)的蒸(zheng)馏水。

（3）将琼脂糖凝胶连续(xu)倒入柱(zhu)子时，要用(yong)玻璃棒的紧靠柱(zhu)子内壁引流，以减少气(qi)泡(pao)的产生，让填料(liao)先自(zi)然沉降。

（4）柱压不超过(guo)0.3MPa，如果装(zhuang)柱系统(tong)中无(wu)法(fa)测柱压，则正常(chang)流速下填装(zhuang)。

（5）填装好的ee-SA FF柱用(yong)2-5个(ge)柱体(ti)积的结合缓(huan)冲溶液平衡，建议流速100cm/h，平衡后(hou)的柱子可以用(yong)于生物(wu)素(su)化蛋白、生物(wu)素(su)化抗原抗体(ti)等生物(wu)素(su)化物(wu)质(zhi)的亲和(he)纯(chun)化。

2、上样

（1）缓冲(chong)液(ye)选择：一般(ban)选用pH6-8的(de)结(jie)合缓冲(chong)液(ye)，常(chang)用缓冲(chong)液(ye)有10-00mM 磷酸钠(na)缓冲(chong)液(ye)、20-200mM Tris-HCl缓冲(chong)液(ye)等，根据样(yang)品的(de)稳定性(xing)，也(ye)可添(tian)加其他成分，如NaCl、还原剂、螯合剂等。在(zai)初次使(shi)用ee-SA FF时(shi)，推荐使(shi)用20mM PBS（20 mM NaH2PO4，0.15M NaCl，NaOH调(diao)节pH 7.4）或20mM Tris-HCl，0.15MNaCl，pH8.0作为结(jie)合缓冲(chong)液(ye)。

（2）样(yang)(yang)品处(chu)理：样(yang)(yang)品的(de)缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)应(ying)与所选结(jie)(jie)合(he)缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)一(yi)致。为保证缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)一(yi)致，可以(yi)在结(jie)(jie)合(he)缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)中破(po)碎细菌、或调(diao)解pH与结(jie)(jie)合(he)缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)一(yi)致、或交换至结(jie)(jie)合(he)缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)（常用(yong)方(fang)法有透析、超滤、脱盐柱(zhu)换液(ye)(ye)(ye)等）、或用(yong)结(jie)(jie)合(he)缓(huan)冲(chong)(chong)液(ye)(ye)(ye)稀(xi)释2-10倍等。样(yang)(yang)品上柱(zhu)前应(ying)0.45μm过滤。

（3）上样流速(su)：一般(ban)线性流速(su)20-100cm/h均可。

3、洗脱

结合了生物(wu)(wu)素(su)化(hua)物(wu)(wu)质的ee-SA FF可采用温(wen)和的方式(shi)洗脱，一般(ban)在结合缓冲(chong)液(ye)中加(jia)入1-5mM的D-生物(wu)(wu)素(su)作为(wei)洗脱缓冲(chong)液(ye)，通(tong)过竞争的方法(fa)洗脱。

4、在位清洗

（1）多次使用后需要(yao)再(zai)生(sheng)(sheng)，本(ben)产品耐受一定的(de)碱性，推荐使用2-5个柱体积(ji)的(de)20-100mM NaOH溶液反向清洗柱子(zi)，进行再(zai)生(sheng)(sheng)。

（2）其他方法，比如1-2M NaCl、70%乙醇、30%异丙(bing)醇等(deng)，也可用于该介(jie)质的再生。

导购指南