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苯基-琼脂(zhi)(zhi)糖(tang)凝胶(jiao)FF是一(yi)种将苯基键合在琼脂(zhi)(zhi)糖(tang)凝胶(jiao)微球上形成的(de)较(jiao)强疏(shu)水性(xing)(xing)(xing)疏(shu)水层析分(fen)(fen)离介质(zhi)(zhi)。该产品保留了琼脂(zhi)(zhi)糖(tang)极好(hao)的(de)亲(qin)水性(xing)(xing)(xing)及(ji)大网(wang)架结构，与(yu)生物(wu)活(huo)性(xing)(xing)(xing)大分(fen)(fen)子有(you)很好(hao)的(de)相容(rong)性(xing)(xing)(xing)，具有(you)载量高，非特异性(xing)(xing)(xing)吸附少，流速快等特点，广泛(fan)用于具有(you)一(yi)定(ding)疏(shu)水性(xing)(xing)(xing)能的(de)蛋白质(zhi)(zhi)、多肽等生物(wu)大分(fen)(fen)子实(shi)验室规(gui)模制备和生物(wu)制药、生物(wu)工程(cheng)的(de)工业化制备。

典型应用如重组(zu)人(ren)粒巨(ju)噬(shi)细(xi)胞(bao)集(ji)落刺激(ji)因(yin)子(zi)(GM-CSF)、粒细(xi)胞(bao)集(ji)落刺激(ji)因(yin)子(zi)(G-CSF)、人(ren)集(ji)落刺激(ji)因(yin)子(zi)(M-CSF)、表皮(pi)生成因(yin)子(zi)(EGF)的生产(chan)以及(ji)单克隆抗体的纯化。

技术指标：

使用方法：

　　1. 装柱

　　1.1 根据分离(li)目标性质配制初(chu)始(shi)缓冲(chong)液(ye)（平衡液(ye)）和洗(xi)脱缓冲(chong)液(ye)。

　　1.2 将凝胶抽(chou)干，并用蒸(zheng)馏水(shui)洗涤2次去除(chu)保存的乙醇(chun)，用蒸(zheng)馏水(shui)配(pei)成匀浆并脱(tuo)气。

　　1.3 将层析(xi)柱垂(chui)直固(gu)定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段(duan)液位。

　　1.4 用(yong)玻璃棒(bang)引导匀浆沿着柱(zhu)内(nei)壁一次性(xing)倒入柱(zhu)内(nei)，使凝(ning)胶在柱(zhu)内(nei)自由沉降。

　　1.5 连结好(hao)柱子顶端(duan)活动(dong)(dong)柱头，打开蠕(ru)动(dong)(dong)泵(beng)，让(rang)缓冲液(ye)用(yong)使(shi)用(yong)时操作流(liu)(liu)速流(liu)(liu)过5柱体积(ji)，再使(shi)用(yong)1.5倍的(de)操作流(liu)(liu)速流(liu)(liu)过5柱体积(ji)，调节适配柱头，使(shi)其尽量贴(tie)近(jin)胶面(mian)，最后用(yong)2 ~ 3倍柱体积(ji)的(de)缓冲液(ye)平衡(heng)柱子。

注意：

1)所有操作(zuo)过程不(bu)能引(yin)入气泡，保(bao)证(zheng)装(zhuang)胶的均匀(yun)度。

2)如无条件(jian)做1.2，填料层有气(qi)泡(pao)，可进行2次装柱，去除保(bao)存的乙醇和(he)气(qi)泡(pao)。

3)乙醇等试剂(ji)配制(zhi)的(de)溶液需要脱气。

　　2. 平衡

　　将平衡缓冲液(ye)以操作(zuo)流速(su)平衡层析柱，观察检(jian)测器的变(bian)化(hua)，直到电导(dao)、pH等参(can)数不变(bian)。

　　3. 上样

　　切换(huan)转换(huan)阀进(jin)行(xing)(xing)上(shang)样(yang)，上(shang)样(yang)量根据样(yang)品的(de)(de)性质(zhi)和层析介质(zhi)的(de)(de)量进(jin)行(xing)(xing)选择，也可进(jin)行(xing)(xing)线性实(shi)验找到最佳(jia)上(shang)样(yang)量；样(yang)品的(de)(de)预处理：置换(huan)缓冲(chong)液(ye)，加盐，澄清过(guo)滤(lv)（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 冲洗

　　用2 ~ 3个柱(zhu)(zhu)体积(ji)的平衡缓冲液冲洗(xi)上样(yang)后的层析柱(zhu)(zhu)，观察检测(ce)器的变(bian)化(hua)，直到电(dian)导、pH等(deng)参数(shu)不(bu)变(bian)，此时未交(jiao)换(huan)的组分被清洗(xi)出去(qu)。

　　5. 洗脱

　　疏水层(ceng)析柱的(de)洗(xi)脱(tuo)可用恒定洗(xi)脱(tuo)、梯度(du)洗(xi)脱(tuo)或者阶跃洗(xi)脱(tuo)，一(yi)般推荐降低盐浓度(du)的(de)梯度(du)洗(xi)脱(tuo)进(jin)行。亦可根据实(shi)际情况，添加有(you)机溶剂进(jin)行洗(xi)脱(tuo)。

　　6. 再生

　　用蒸馏水按(an)操(cao)作流速冲洗3 ~ 5个(ge)(ge)柱体积(ji)，接(jie)着用平衡(heng)液洗到平衡(heng)3 ~ 5个(ge)(ge)柱体积(ji)。

　　若有失活蛋白质(zhi)或脂类物质(zhi)在再生(sheng)时洗(xi)不(bu)掉(diao)，可用在位清洗(xi)（CIP）除去。

　　7. 在位清(qing)洗(CIP)

　　对于强(qiang)结合(he)蛋(dan)白质(zhi)或脂类物质(zhi)，可采用(yong)以下(xia)流程(cheng)进(jin)行(xing)在位(wei)清洗(xi)：1 mol/L NaOH洗(xi)2个柱(zhu)(zhu)体积(ji)(ji)，8 mol/L尿(niao)素洗(xi)2个柱(zhu)(zhu)体积(ji)(ji)， 30%异丙醇洗(xi)2个柱(zhu)(zhu)体积(ji)(ji)，平(ping)衡缓(huan)冲液洗(xi)2个柱(zhu)(zhu)体积(ji)(ji)。

　　在(zai)位清洗可有效(xiao)去除介质上(shang)的杂质，反向(xiang)效(xiao)果更佳。如需要去除内(nei)毒素(su)热(re)原(yuan)，可以在(zai)50 cm/h速度(du)下，1 mol/L NaOH清洗1 ~ 2 h。

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