相关介绍： 

蛋白(bai)(bai)A是一种(zhong)金黄色(se)葡萄球(qiu)菌细胞(bao)壁(bi)蛋白(bai)(bai)质，包(bao)含(han)有5个区(qu)域，可(ke)以同IgG的(de)Fc片段结合(he)。作为(wei)一个亲和配(pei)基，蛋白(bai)(bai)A能够比较紧密地偶联到NUPharose上，使(shi)得这些(xie)区(qu)域可(ke)以同游离的(de)IgG自由结合(he)。一分(fen)子(zi)(zi)的(de)蛋白(bai)(bai)A可(ke)以结合(he)两分(fen)子(zi)(zi)的(de)IgG。

技术指标：

抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：

注：-表(biao)示不结(jie)(jie)合(he)；+表(biao)示微(wei)弱(ruo)结(jie)(jie)合(he)；++表(biao)示中等结(jie)(jie)合(he)；+++表(biao)示很强(qiang)结(jie)(jie)合(he)。

应用举例：

结合缓(huan)冲液：20 mM磷酸缓(huan)冲液，150 mM NaCl，pH 7.4

洗脱缓(huan)冲液：0.1 M柠(ning)檬酸缓(huan)冲液，pH 4.0

中和缓冲(chong)液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0

1)1 ml重组蛋(dan)白A琼脂糖凝胶预填柱用5 ~ 10个柱床体积(ji)的蒸(zheng)馏水洗去(qu)保存液(ye)；

2)用结(jie)合缓冲液结(jie)合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱(zhu)床体积；

3)将5 ml兔多(duo)抗血(xue)清用结(jie)合(he)缓冲(chong)液稀(xi)释到50 ml，0.45 μm滤膜过(guo)滤上(shang)样；

4)用结合缓冲(chong)液(ye)再洗 5 ~ 10个柱床体(ti)积；

5)用(yong)洗(xi)脱缓(huan)冲液洗(xi)脱抗体，收(shou)集(ji)洗(xi)脱峰，并用(yong)中和(he)缓(huan)冲液调(diao)节其pH至中性；

6)每次使(shi)用(yong)后用(yong)3 ~ 5个(ge)柱(zhu)床体(ti)积的0.1 M 柠檬酸缓冲液（pH 3.0）再生清洗；

7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗(xi)脱下来的兔多抗纯(chun)度在95%以上。

图 1

注意事项：

1)预填柱使用简易方便，在没有(you)仪器设备的条件下也可以完成纯(chun)化(hua)任务。

2)样品(pin)洗脱后(hou)一般pH很低，应立即(ji)用碱性(xing)中(zhong)和缓冲液(ye)（如(ru)(ru)1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到(dao)的(de)抗(kang)体(ti)溶液(ye)中(zhong)和到(dao)中(zhong)性(xing)，或在收集容器中(zhong)事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的(de)缓冲液(ye)（如(ru)(ru)1 M Tris-HCl或1 M 磷(lin)酸缓冲液(ye)），以利(li)于(yu)维持抗(kang)体(ti)的(de)生(sheng)物活性(xing)，避免抗(kang)体(ti)失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液(ye)的温度(du)一致，避免柱床内产生气泡(pao)，影响纯化效果，如(ru)果已经产生气泡(pao)，可(ke)以自(zi)行重装柱子。

4)通常（每次）目标样(yang)品(pin)洗(xi)脱(tuo)后应(ying)继续用0.1 M柠檬(meng)酸缓冲(chong)液(ye)（pH 2 ~ 3）洗(xi)3 ~ 5个柱(zhu)体(ti)积，然(ran)后用平衡缓冲(chong)液(ye)清(qing)洗(xi)5个柱(zhu)体(ti)积以上，作简易再(zai)生。

5)使用(yong)(yong)数(shu)次后应进行在(zai)位(wei)(wei)清(qing)洗(xi)(xi)，建议用(yong)(yong)0.1% Triton X-100 37℃洗(xi)(xi)1 ~ 3个柱(zhu)(zhu)体(ti)(ti)(ti)积（10 ~ 30 min），立即用(yong)(yong)平衡缓冲(chong)液清(qing)洗(xi)(xi)5个柱(zhu)(zhu)体(ti)(ti)(ti)积以(yi)上(shang)；或70%乙(yi)醇洗(xi)(xi)5个柱(zhu)(zhu)体(ti)(ti)(ti)积以(yi)上(shang)（可保持4 ~ 16 h），再用(yong)(yong)平衡缓冲(chong)液清(qing)洗(xi)(xi)5柱(zhu)(zhu)体(ti)(ti)(ti)积以(yi)上(shang)。在(zai)位(wei)(wei)清(qing)洗(xi)(xi)能去除强疏(shu)水性蛋白质(zhi)和脂类(lei)，恢(hui)复柱(zhu)(zhu)子的载(zai)量和流速。

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导购指南