相关介绍：

链球菌G蛋白(bai)（Streptococcus Protein G 简称SPG）是G、C型链球菌细(xi)胞壁中的一种蛋白(bai)质(zhi)，能特异(yi)性地同免(mian)疫(yi)球蛋白(bai)IgG分(fen)子(zi)的Fc段(duan)结合而不影响(xiang)其Fab段(duan)与抗原(yuan)分(fen)子(zi)结合的能力，其亲(qin)和(he)填料可以用于从血清、腹水(shui)、组织培养物等上(shang)清中结合吸附并纯化免(mian)疫(yi)球蛋白(bai)（抗体(ti)）。

技术指标：

抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：

注：-表(biao)示不结合(he)；+表(biao)示微弱结合(he)；++表(biao)示中等结合(he)；+++表(biao)示很强结合(he)。

应用举例：

结合缓(huan)冲液(ye)：20 mM磷(lin)酸盐缓(huan)冲液(ye)（PB），pH 7.4

洗脱缓(huan)冲液：0.1 M甘(gan)氨(an)酸-盐(yan)酸缓(huan)冲液，pH 2.7

中和缓(huan)冲液(ye)：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重(zhong)组蛋白(bai)G琼脂糖凝胶预(yu)填柱(zhu)(zhu)，用5 ~ 10个柱(zhu)(zhu)床体积的蒸馏水洗去保存液；

2)用结合(he)缓冲液平衡(heng) 5 ~ 10个柱床(chuang)体积；

3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液(ye)稀释至50 ml，0.45 μm滤膜过(guo)滤上(shang)样(yang)；

4)用结(jie)合缓冲(chong)液平衡(heng) 5 ~ 10个(ge)柱床体积至(zhi)基线(xian)；

5)用洗脱(tuo)缓冲(chong)液洗脱(tuo)抗(kang)体，收集(ji)洗脱(tuo)峰，并(bing)用中和缓冲(chong)液调节(jie)其pH至(zhi)中性；

6)每(mei)次(ci)使用(yong)后再(zai)用(yong)3 ~ 5个柱床体积的洗脱缓(huan)冲液再(zai)生清洗；

7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下(xia)来的兔多抗纯度在95%以(yi)上。

图 1

注意事项：

1)预填柱(zhu)使用简易(yi)方便(bian)，在(zai)没有仪器设备的条(tiao)件下也可以完成(cheng)纯(chun)化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓(huan)冲(chong)液（如(ru)(ru)1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收(shou)集到(dao)的(de)抗体溶(rong)液中和到(dao)中性，或(huo)在(zai)收(shou)集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的(de)缓(huan)冲(chong)液（如(ru)(ru)1 M Tris-HCl或(huo)1 M 磷酸(suan)缓(huan)冲(chong)液），以利(li)于维持抗体的(de)生物(wu)活性，避免抗体失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一(yi)致，避免柱床(chuang)内产生气(qi)泡，影响纯化效果，如果已经产生气(qi)泡，可以自(zi)行重(zhong)装柱子。

4)通常(chang)目标样品洗(xi)脱后(hou)应(ying)继续用0.1 M甘氨酸-盐(yan)酸缓冲液（pH 2.0 ~ 2.7）洗(xi)3 ~ 5个柱体积，然后(hou)用平(ping)衡缓冲液清(qing)洗(xi)5个柱体积以上(shang)，作简易(yi)再生。

5)使用(yong)数(shu)次后应进行在位(wei)清(qing)洗(xi)(xi)，建议用(yong)0.1% Triton X-100 37℃洗(xi)(xi)1 ~ 3个柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)（10 ~ 30 min），立即用(yong)平衡缓冲(chong)液清(qing)洗(xi)(xi)5个柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以上(shang)；或(huo)70%乙醇洗(xi)(xi)5个柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以上(shang)（可(ke)保持4 ~ 6 h），再用(yong)平衡缓冲(chong)液清(qing)洗(xi)(xi)5柱(zhu)(zhu)体(ti)积(ji)(ji)(ji)以上(shang)。在位(wei)清(qing)洗(xi)(xi)能去除(chu)强疏水(shui)性蛋白质和脂类，恢复柱(zhu)(zhu)子的(de)载量和流速(su)。

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导购指南