相关介绍： 

耐碱蛋(dan)(dan)白A琼脂(zhi)糖(tang)凝(ning)胶FF与普通的蛋(dan)(dan)白A琼脂(zhi)糖(tang)凝(ning)胶相比(bi)，主要提(ti)高(gao)了凝(ning)胶的耐碱性，可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除热(re)源。在骨架与重组耐碱蛋(dan)(dan)白A键合(he)上(shang)分别设计了延伸(shen)碳臂和定向结(jie)合(he)位点，保证了重组耐碱蛋(dan)(dan)白A与骨架的定向牢固键合(he)，以及与抗体的高(gao)效亲和。

技术指标：

产品特点：

1）配(pei)基脱落(luo)：约1~7 ng rat-PA/mg IgG，配(pei)套的(de)(de)rat-PA试剂盒（NRPB53S）检测多次使用的(de)(de)洗脱液(ye)中残留(liu)rat-PA含量

2）耐碱性

在25℃的条件下(xia)，将rat-PA浸(jin)在不(bu)同(tong)浓度(du)的NaOH溶液中(zhong)：

0.1 M 处理(li)72 h载(zai)量维持在90%以上(shang)；

0.5 M处理16 h在80%以(yi)上，处理36 h在50%以(yi)上；

1.0 M处理4 h在90%以上，处理8 h在50%以上。

3）耐酸性

在(zai)25℃的条件下，将rat-PA浸在(zai)不(bu)同pH的酸溶液中(zhong)：

pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 处理(li)6天载量均(jun)维(wei)持在90%以上

0.5 M HCl处理2天(tian)载量(liang)在80%以上，处理6天(tian)在50%以上 

4）耐压性

仪器：AKTA explorer 100

柱子：1.0 cm×30 cm

流速(su)：每30 s增(zeng)加0.5 ml/min

5）使用寿命

200次(ci)循环纯化牛(niu)血清(qing)中IgG，每次(ci)使用(yong)0.1 M NaOH处理(li)15 min，200次(ci)使用(yong)后未发(fa)现明显的载量损失。

应用举例：

结合缓冲液(ye)：20 mM磷酸缓冲液(ye)，150 mM NaCl，pH 7.4

洗脱缓(huan)冲(chong)液：0.1 M柠檬酸(suan)缓(huan)冲(chong)液，pH 4.0

中和缓(huan)冲(chong)液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml耐碱蛋(dan)白A琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个(ge)柱床体(ti)积的(de)蒸馏水(shui)洗去保存(cun)液(ye)；

2)用(yong)结合缓冲液结合缓冲液平(ping)衡 5 ~ 10个柱床(chuang)体(ti)积；

3)将5 ml兔多抗血清(qing)用结合缓冲液稀释到(dao)50 ml，0.45 μm滤膜过(guo)滤上样(yang)；

4)用结(jie)合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床(chuang)体积；

5)用洗脱缓(huan)冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓(huan)冲液调节其pH至中性；

6)每次使用(yong)后用(yong)3 ~ 5个柱床体积的0.1 M NaOH溶液(ye)再生清(qing)洗；

7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱(tuo)下来的兔(tu)多(duo)抗(kang)纯(chun)度在95%以(yi)上。

图 1

注意事项：

1)预填柱使用简易方(fang)便，在(zai)没有仪器设备的(de)条(tiao)件(jian)下也(ye)可以完成纯化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性(xing)(xing)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)和(he)缓冲液（如(ru)1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将(jiang)收集(ji)(ji)到(dao)的抗(kang)体溶液中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)和(he)到(dao)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)性(xing)(xing)，或在收集(ji)(ji)容(rong)器中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)事先装(zhuang)5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如(ru)1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以(yi)利于(yu)维持抗(kang)体的生物活性(xing)(xing)，避免抗(kang)体失活。

3)使用(yong)时保证柱(zhu)子和缓(huan)冲(chong)液的(de)温度一致，避免柱(zhu)床内(nei)产生气泡，如果已经产生气泡，可以自(zi)行重装(zhuang)柱(zhu)子。

4)使用后应进行在位清(qing)(qing)洗，一般建议用0.1 M NaOH清(qing)(qing)洗1 ~ 3个(ge)柱体积(ji)（10 ~ 30 min），立(li)即用平(ping)衡缓冲液(ye)清(qing)(qing)洗5个(ge)柱体积(ji)以上。

5)更高要求（消毒(du)、去内(nei)毒(du)素、超牢固蛋白残留等）的(de)在(zai)位清(qing)洗(xi)，可以(yi)先用(yong)(yong)(yong)含还(hai)原剂（如100 mM DTT、β-ME或(huo)1-巯基甘油）的(de)平(ping)衡缓冲液清(qing)洗(xi)3 ~ 5个(ge)柱(zhu)(zhu)体积，再用(yong)(yong)(yong)0.1 ~ 0.5 M NaOH洗(xi)1 ~ 5个(ge)柱(zhu)(zhu)体积（10 ~ 30 min），然后用(yong)(yong)(yong)无菌无内(nei)毒(du)素的(de)平(ping)衡缓冲液清(qing)洗(xi)5个(ge)柱(zhu)(zhu)体积以(yi)上。

6)虽然(ran)本产品(pin)具有较好(hao)的碱耐受性，但(dan)长期使用(yong)(yong)较高的NaOH浓度（如0.5 mol/L）清洗(xi)仍(reng)会缩短(duan)使用(yong)(yong)寿命，建议(yi)每1 ~ 3次用(yong)(yong)0.1 M NaOH清洗(xi)1次，每5 ~ 20次用(yong)(yong)0.5 M NaOH清洗(xi)1次。

7)为(wei)了更好的(de)(de)保护填料，应(ying)避免强烈的(de)(de)pH变(bian)化，建议酸性洗脱目的(de)(de)抗体后(hou)，用平衡缓冲液恢复至中(zhong)性，再(zai)进行NaOH清(qing)洗。

8)本产品具有极低的配基(ji)脱(tuo)落(luo)率(lv)（＜10 ng/mg IgG），结合耐碱特性，特别适(shi)用于单克隆抗(kang)体的生产。但实验发现长(zhang)期储存后首次(ci)使用配基(ji)脱(tuo)落(luo)率(lv)会(hui)比较高，建议长(zhang)期储存后的首次(ci)使用，先用酸性洗脱(tuo)液清洗3 ~ 5个(ge)柱体积(ji)，再用平(ping)(ping)衡(heng)缓冲液平(ping)(ping)衡(heng)和(he)样(yang)品纯化。

推荐流速

预装柱体积 1 ml 5 ml 10 ml

流速(ml /min ) 0.2 1 2

9)

导购指南