相关介绍：

GST-琼(qiong)脂糖凝(ning)胶FF是一种将谷胱甘(gan)肽键(jian)合(he)在琼(qiong)脂糖凝(ning)胶微球(qiu)上形(xing)成的生物(wu)亲和层(ceng)析分离(li)介(jie)质。该产品保留了(le)琼(qiong)脂糖极好的亲水性(xing)及大(da)网架结构，与生物(wu)活性(xing)大(da)分子有很好的相容性(xing)，具有载量(liang)高，非(fei)特异性(xing)吸附少，流速(su)快等特点，主要用于谷胱甘(gan)肽转(zhuan)移酶标记蛋白（GST融合(he)蛋白）、谷胱甘(gan)肽转(zhuan)移酶和谷胱甘(gan)肽依赖(lai)蛋白的分离(li)纯化(hua)。

技术指标：

使用方法：

　　1. 装柱

　　1.1 根据分离目标(biao)性质配(pei)制初始(shi)缓冲液（平(ping)衡液）和洗脱缓冲液。

　　1.2 将凝胶抽干，并(bing)(bing)用(yong)蒸馏水洗(xi)涤2次(ci)去除保存(cun)的乙醇，用(yong)蒸馏水配成匀浆并(bing)(bing)脱气。

　　1.3 将层析(xi)柱(zhu)垂(chui)直固定，底(di)端(duan)用水或缓冲(chong)液(ye)(ye)润湿并保持一段液(ye)(ye)位。

　　1.4 用玻璃棒(bang)引导匀浆沿着(zhe)柱内(nei)壁一(yi)次性(xing)倒(dao)入柱内(nei)，使(shi)凝胶在柱内(nei)自由沉降。

　　1.5 连(lian)结好柱(zhu)(zhu)(zhu)子顶端活(huo)动(dong)柱(zhu)(zhu)(zhu)头，打开(kai)蠕动(dong)泵，让缓(huan)冲液(ye)用(yong)使用(yong)时(shi)操(cao)(cao)作流(liu)速流(liu)过(guo)5柱(zhu)(zhu)(zhu)体积，再使用(yong)1.5倍(bei)的操(cao)(cao)作流(liu)速流(liu)过(guo)5柱(zhu)(zhu)(zhu)体积，调节适配柱(zhu)(zhu)(zhu)头，使其尽量贴近胶面，最后用(yong)2 ~ 3倍(bei)柱(zhu)(zhu)(zhu)体积的缓(huan)冲液(ye)平衡柱(zhu)(zhu)(zhu)子。

注意：

1)所有操(cao)作过程不能引(yin)入气泡，保证装胶的均(jun)匀度。

2)如无条件做(zuo)1.2，填(tian)料层有气泡，可进行(xing)2次装柱(zhu)，去除(chu)保存(cun)的乙醇和气泡。

3)乙醇(chun)等(deng)试剂配(pei)制的溶液(ye)需要脱气(qi)。

　　2. 平衡

　　将平衡缓(huan)冲液以(yi)操作流速平衡层析柱，观察检测(ce)器的(de)变(bian)(bian)化(hua)，直到电导、pH等参(can)数不(bu)变(bian)(bian)。推荐的(de)结(jie)合(he)平衡缓(huan)冲液为：10 mM PBS (140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7.4)。

　　3. 上样

　　切换转换阀进(jin)行(xing)(xing)上样(yang)，上样(yang)量根据样(yang)品(pin)(pin)的(de)性(xing)质和层析介质的(de)量进(jin)行(xing)(xing)选(xuan)择，也可进(jin)行(xing)(xing)线性(xing)实验(yan)找到最佳上样(yang)量；样(yang)品(pin)(pin)的(de)预处理：置换缓冲(chong)液(ye)，澄清过滤（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 冲洗

　　用2 ~ 3个柱体积(ji)的(de)平衡缓(huan)冲(chong)液冲(chong)洗上样后(hou)的(de)层析柱，观察检测器的(de)变化(hua)，直(zhi)到电导、pH等参数(shu)不变，此时未交换的(de)组分被(bei)清洗出(chu)去。

　　5. 洗脱

　　一般推荐(jian)(jian)用10 mM还原型谷胱甘(gan)肽(tai)溶液（可含缓冲成分）进行洗(xi)脱(tuo)。推荐(jian)(jian)的洗(xi)脱(tuo)缓冲液为：50 mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱甘(gan)肽(tai)(GSH), pH 8.0。

　　6. 再生

　　用(yong)蒸馏水按操作流速冲洗(xi)3 ~ 5个柱(zhu)体积，接着用(yong)平衡液洗(xi)到(dao)平衡3 ~ 5个柱(zhu)体积。

　　若有失活蛋(dan)白质或脂类物(wu)质在再生(sheng)时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除(chu)去。

　　7. 在位清洗(CIP)

去除沉淀和变性蛋白：用2 CV 6 M盐酸胍清洗(xi)，立即用10 mM PBS(pH 7.4)洗(xi)5 CV。

去除强疏水蛋白：用3 ~ 4 CV 70%乙醇清(qing)洗(xi)，立即(ji)用10 mM PBS(pH 7.4)洗(xi)5 CV。

注意事项：

导购指南